Il libro delle Istruzioni è un manoscritto non tutto autografo, in effetti delle 47 Istruzioni solo 7 sono autografe. Le correzioni della Vendramini attestano la rilettura da parte sua di quanto le suore annotavano durante i suoi incontri formativi perché poi fossero fatti recapitare a suore e comunità. Più suore hanno trascritto le parole che Elisabetta dirigeva loro per istruirle, correggerle, animarle sulla via della perfezione evangelica.

Le Istruzioni non seguono né un ordine cronologico, né un piano logico. I contenuti sono vari: anno liturgico, argomenti di vita religiosa, di comunità, di vita apostolica, voti di obbedienza, povertà e castità. Sono ricche di consigli che rendono evidente l’alta maturità spirituale della Fondatrice e la sua sapienza formativa che traduce in consigli pratici e con indicazioni di itinerari spirituali.